產品英文名稱：Pichia pastoris HCP ELISA kit
產品中文名稱：畢赤酵母宿主細胞蛋白免疫檢測試劑盒

Pichia pastoris HCP ELISA kit 產品介紹：
Pichia pastoris畢赤酵母基因表達系統(tǒng)經(jīng)過十多年發(fā)展，成為較完善的外源基因酵母表達系統(tǒng)，具有易于高密度酵母發(fā)酵，欲表達基因可以穩(wěn)定整合在宿主酵母基因組中，能使產物有效分泌并適當糖基化，培養(yǎng)方便經(jīng)濟等特點。Pichia pastoris畢赤酵母基因表達系統(tǒng)利用強效可調控啟動子AOX1，已高效表達了HBsAg、TNF、EGF、破傷風毒素C片段、基因工程抗體等多種外源基因，證實Pichia pastoris畢赤酵母表達系統(tǒng)為高效、實用、簡便 ，以提高表達量并保持產物生物學活性為突出特征的外源基因表達系統(tǒng)，而且非常適宜擴大為工業(yè)規(guī)模Pichia pastoris畢赤酵母發(fā)酵。
Pichia pastoris HCP ELISA試劑盒用于檢測在畢赤酵母表達系統(tǒng)中重組表達的產物宿主細胞蛋白污染。zui低檢測濃度<0.3ng/mL。

§檢測原理：Vero Cell檢測是一個雙位點酶聯(lián)免疫檢測。樣本中包含的Pichia pastoris HCPs蛋白與標記有抗- Pichia pastoris抗體的辣根過氧化物酶同時反應，反應發(fā)生在之前涂有一層吸附性抗- Pichia pastoris蛋白抗體的微量滴定板中進行。免疫反構成為夾層式結構：固相抗休-HCP-酶標記抗體。反應結束后清洗微量滴定板去除未結合反應物。添加TMB作用底物反應。微量滴定板讀數(shù)器上測定水解物濃度，水解物濃度與Pichia pastoris HCPs蛋白濃度成比例。用提供的標準液繪制標準曲線，根據(jù)讀數(shù)可以計算出Pichia pastoris HCPs蛋白含量。

§檢測過程：標準檢測：取出所有試劑平衡到室溫→分別移取25µl標準液，對照物和樣品至待測孔→移取100µl anti- Pichia pastoris:HRP（#F141）至每孔→密封滴定板，搖床室溫溫育3小時（快速檢測時溫育1小時），180rpm→清空小孔，用紙吸干殘留液，350µl清洗緩沖液清洗4次→加100µl TMB 作用物（#F005）→室溫靜置30分鐘，不需搖床→加100µl反應終止液（#F006）→分光光度計450/650nm讀數(shù)

§結果分析：標準液（0, 1, 4, 20, 75, 250ng/mL）可用于制作標準曲線，標準液濃度相當于免疫反應HCP總濃度。根據(jù)測定的小孔中標準液吸光值繪制標準曲線。數(shù)據(jù)分析可以使用計算機選配曲線，例如點到點，三次樣本函數(shù)，或四參數(shù)邏輯曲線。不要使用線性回歸分析修改樣品吸光值，這樣會出現(xiàn)顯著誤差。也可以手工繪圖，Y軸標注吸光值，X軸標注濃度。然后根據(jù)樣品吸光值計算出樣品中HCP濃度。（操作時每一濃度標準液都要滴定到兩個小孔中，以便計算平均分光光度值，樣品也需計算平均吸光值）。

Pichia pastoris HCP ELISA kit產品組份：
● Anti- Pichia pastoris:HRP（辣根過氧化物酶標記）     1x12mL   F141（Product#）
● Anti- Pichia pastoris coated微量滴定板           12x8孔  F142
● Pichia pastoris HCP標準液（0, 1, 4, 20, 75, 250ng/mL）   1mL/瓶 F143
● Stop Solution終止液（0.5M硫磺酸）           1x12mL F006
● TMB （3,3’,5,5’-四甲基聯(lián)苯氨）                 1x12mL F005
● Wash Concentrate清洗物（20倍濃縮）             1x50mL   F004 

訂購信息：
F550 Cygnus CHO HCP ELISA Kit 96T/盒
F410 Cygnus E.coli HCP ELISA Kit 96T/盒
F500 Cygnus Vero Cell HCP ELISA Kit 96T/盒
F140 Cygnus Pichia pastoris ELISA Kit 96T/盒

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