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間充質干細胞(MSC)如何培養(yǎng)與鑒定?

更新時間:2020-10-30 點擊次數:3017

相比于胚胎干細胞或神經干細胞,MSC具有易獲取、易體外培養(yǎng)、傳代穩(wěn)定性、低免疫原性等優(yōu)勢,在體外經過多次傳代后仍具有多向分化和自我復制的潛能,且MSCs多來自于成年的組織,研究過程的道德和倫理學問題較小。

MSC的大小與形狀具有異質性,即不同種屬或不同組織的MSC具有不同的生長形態(tài),例如三極形、長梭形、小圓形、短梭形和扁平形態(tài)。幾乎所有的MSC都是貼壁生長,具有較強的貼壁能力,而MSC的原代分離也正是利用了MSC強貼壁的特性。例如,骨髓MSC的分離方法為:將從組織中分離出來的單個核細胞懸浮培養(yǎng)于含有FBS的培養(yǎng)基中,1~2天后去除非貼壁細胞,保留貼壁細胞再培養(yǎng)2-3周即可獲得。此外也可采用免疫磁珠對MSC進行分選,但這種方法成本較高。

對于MSC的鑒定,常采用的方式包括形態(tài)學鑒定,表面標志物鑒定和多系分化潛能鑒定。MSC一般呈纖維細胞樣生長,細胞在支持物表面呈梭形或不規(guī)則三角形生長,細胞中央有卵圓形核,胞質向外伸出2-3厘米長短不同的突起MSC的細胞表面標志物則常采用流式細胞儀進行鑒定,不同組織來源的MSCs可共享相同的細胞表面標記,如CD29和CD44。但目前我們對MSC表面分子標志物的研究還不完善,已發(fā)現的表面標志物也存在特異性不強的問題,為了讓我們更好地分離、培養(yǎng)和鑒定MSC,需進一步不斷發(fā)現新的特異性標志物。

 

 

                                         常見的方法 

 

茜素紅染色(成骨誘導)

茜素紅S(AlizarinRedS)鈣染色法是一種旨在通過鰲和技術,使鈣離子和茜素紅S產生復合物,來分析固定處理的細胞樣本中橘紅色鈣沉積現象的經典的技術方法。主要適用于動物原生代或培養(yǎng)細胞的鈣沉積和鈣化結節(jié)檢測。廣泛用于骨細胞或組織病理生理的研究。操作簡捷,性能穩(wěn)定,顯色清晰。

 

Oil Red O(油紅O)染色成脂誘導

作為脂肪細胞的染色劑的原理是使用Oil Red O 的油溶性,對其它的細胞結構著色性差。成脂肪誘導的過程中,細胞在胞漿中不斷有油滴的累積,并不斷的增加變大,后整個細胞的胞漿中都是油滴。Oil Red O染色的方法是對油滴的染色的一種方法。

 

成軟骨誘導(試劑盒)

 

 

 

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Lifeline

LL-0050

成脂培養(yǎng)基套裝

Lifeline

LL-0051

阿爾辛藍色染色試劑盒

Lifeline

LL-0052

油紅O染色試劑盒

Lifeline

LL-0059

成脂誘導培養(yǎng)基套裝

StemCell

05465

MesenCult™成骨分化套件(人類)

StemCell

05412

MesenCult™成脂分化試劑盒(人類)

StemCell

05455

MesenCult™-ACF軟骨分化試劑盒

 

 

品牌  貨號             產品信息
HY STEMCELLHX0201MCCGmHuMTM人間充質干細胞無血清培養(yǎng)基,成分確定、無血清、無異源物
Corning88-600-CVMSC xeno-free SFM
LifelineLL-0062骨髓MSC*培養(yǎng)基套裝
LifelineLL-0034人間充質干細胞培養(yǎng)基套裝
LifelineLL-0073NSC+纖連
蛋白 細胞培養(yǎng)基套裝
Lifeline LL-0070NSC 培養(yǎng)基套裝
LifelineLL-0062骨髓MSC*培養(yǎng)基套裝
LifelineLL-0034人間充質干細胞培養(yǎng)基套裝
StemCell05445StemCell MesenCultTM 人間充質干細胞培養(yǎng)基,成分確定、無異源
StemCell05448StemCell MesenCultTM 人間充質干細胞培養(yǎng)基,成分確定、無異源
BI 05-200-1AMSC無血清培養(yǎng)基

 

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