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細胞凍存液的操作步驟

更新時間:2016-10-27 點擊次數(shù):2042
     細胞凍存液是利用凍存技術(shù)將細胞置于-196℃液氮中低溫保存,可以使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細胞特性保存起來,這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞,可以防止因正在培養(yǎng)的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種,起到了細胞保種的作用。除此之外,還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞。
    細胞凍存液的操作步驟:
    (一)細胞凍存
    1. 配制含10%DMSO或甘油、10~20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液;
    2. 取對數(shù)生長期的細胞,用胰蛋白酶把單層生長的細胞消化下來,懸浮生長的細胞則直接將細胞移至15ml離心管中;
    3. 離心1000rpm,5min;
    4. 去除胰蛋白酶及舊的培養(yǎng)液,加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液,用吸管輕輕吹打使細胞均勻,計數(shù),調(diào)節(jié)凍存液中細胞的zui終密度為5×106/ml~1×107/ml;
    5. 將細胞分裝入凍存管中,每管1~1.5 ml;
    6. 在凍存管上標明細胞的名稱,凍存時間及操作者;
    7. 凍存:標準的凍存程序為降溫速率-1~-2℃/ min;當溫度達-25℃以下時,可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃時,則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ,然后放入-70℃冰箱中過夜,取出凍存管,移入液氮容器內(nèi)。
    (二) 細胞復蘇
    1. 從液氮容器中取出凍存管,直接浸入37℃溫水中,并不時搖動令其盡快融化。
    2. 從37℃水浴中取出凍存管,打開蓋子,用吸管吸出細胞懸液,加到離心管并滴加10倍以上培養(yǎng)液,混勻;
    3. 離心, 1000rpm,5min;
    4. 棄去上清液,加入含10%小牛血清培養(yǎng)液重懸細胞,計數(shù),調(diào)整細胞密度,接種培養(yǎng)瓶,37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng);
    5. 次日更換一次培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)。

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